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A549/DDP細(xì)胞-A549/DDP耐藥株
2017-04-12 瀏覽次數(shù)：1778
A549/DDP細(xì)胞-A549/DDP耐藥株細(xì)菌破壁方法:細(xì)菌破壁是成功提取DNA的關(guān)鍵步驟之一。革蘭氏陽(yáng)性菌的肽聚糖層構(gòu)成堅(jiān)韌的三維立體結(jié)構(gòu),而陰性菌肽聚糖層構(gòu)成疏松的二維結(jié)構(gòu),因此不同種類細(xì)菌的破壁方法不同。目前破壁方法有十二烷基磺酸鈉（SDS）裂解法、溶菌酶法、反復(fù)凍融法、研磨法、超聲波法等。不同細(xì)菌對(duì)溶解劑有不同的抗性,溶解細(xì)菌前需先取少量菌懸液,加一定濃度的溶解劑,看是否能溶解菌體。若SDS和溶菌酶均能溶解菌體,使用既廉價(jià)又能抑制DNase的SDS;若需用溶菌酶應(yīng)加入SDS促進(jìn)溶菌;如果60℃溶菌過(guò)程緩慢,可將溫度提高到70～75℃;A549/DDP細(xì)胞-A549/DDP耐藥株有些菌也可用脫氧膽酸鹽破裂細(xì)胞膜溶解菌體。對(duì)溶解劑有抗性的菌類,可在含青霉素或甘氨酸的培養(yǎng)基中培養(yǎng),使其不形成細(xì)胞壁。如SDS和酶破壁效果不理想,可同時(shí)用反復(fù)凍融、超聲波或氧化鋁和玻璃粉研磨輔助破壁。
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